Den geniale, men gale eneboer Doktor Mabuse bliver indlagt på et psykiatrisk hospital. I verden udenfor blive der begået gennemtænkte avancerede forbrydelser, og politiet er forvirret over kriminalitetens niveau. På hospitalet har Mabuse magten over de andre patienter. Gennem hypnotisering og manipulation styrer han underverdenen, til trods for at han tilsyneladende ingen kontakt har til den. Doktor Mabuses Testamente blev forbudt i det Tredje Rige og blev Fritz Langs sidste film, inden han flygtede ud af landet, efter at propagandaministeren Joseph Goebbels forsøgte at få ham anholdt.